Neotropical Entomology (2002) 31, 225-231

Charles M. Oliveira, Maria H.P. Fungaro, Luís E.A. Camargo and João R.S. Lopes (2002)
Análise Comparativa da Estabilidade do DNA de Dalbulus maidis (DeLong and Wolcott) (Hemiptera: Cicadellidae) sob Diferentes Métodos de Preservação Para Uso em RAPD-PCR
[Comparative analysis of the stability of DNA of Dalbulus maidis (DeLong and Wolcott) (Hemiptera: Cicadellidae) under different methods of preservation for use in RAPD-PCR]
Neotropical Entomology 31 (2), 225-231
Abstract: The appropriate preservation of the DNA of a certain organism is important for successful application of molecular techniques like RAPD-PCR. This study was designed to compare simple methods of preservation of specimens of Dalbulus maidis (DeLong and Wolcott) (Hemiptera: Cicadellidae) with respect to quantity and quality of DNA for use in RAPD-PCR, after different storage periods. Eight methods were tested: freezing (-20^oC); ethyl alcohol 70% (-20^oC and room temperature); absolute ethyl alcohol (-20^oC and room temperature); air-dry; and preservation in extraction buffer (whole and homogenized insect). At intervals of 10 to 30 days, insect DNA was extracted, quantified and amplified through RAPD-PCR using primer OPA-04. The quality of extracted DNA was observed on 0.8% agarose gel. After 210 days of preservation, freezing (-20^oC) showed to be the best method. Satisfactory quantities of DNA were also obtained from insects conserved in absolute ethyl alcohol (-20^oC), ethyl alcohol 70% (-20^oC) and extraction buffer (whole and homogenized insect). Insects conserved in absolute ethyl alcohol (room temperature), ethyl alcohol 70% (room temperature) and air-dry conditions were inappropriate for RAPD-PCR studies after 120, 60 and 10 days of storage, respectively.

A preservação adequada do DNA de um determinado organismo é fundamental para o sucesso no uso de técnicas moleculares como RAPD-PCR. O objetivo deste trabalho foi comparar métodos simples de preservação de espécimes de Dalbulus maidis (DeLong and Wolcott) (Hemiptera: Cicadellidae) quanto à quantidade e qualidade do DNA para uso em RAPD-PCR, após períodos sucessivos de armazenamento. Avaliaram-se oito métodos: congelamento (-20^oC); álcool etílico 70% (-20^oC e temperatura ambiente); álcool etílico absoluto (-20^oC e temperatura ambiente); secagem ao ar; e preservação em tampão de extração (inseto inteiro e macerado). A intervalos de 10-30 dias, o DNA foi extraído, quantificado e amplificado via RAPD-PCR pelo oligonucleotídeo OPA-04. A qualidade do DNA extraído foi observada em gel de agarose 0,8%. Após 210 dias de armazenamento, o congelamento (-20^oC) mostrou ser a melhor técnica. Quantidades satisfatórias de DNA também foram obtidas dos insetos conservados em álcool etílico absoluto (-20^oC), álcool etílico 70% (-20^oC) e tampão de extração (inseto inteiro e macerado). Insetos conservados em álcool etílico absoluto (temperatura ambiente), em álcool etílico 70% (temperatura ambiente) e secos ao ar mostraram-se impróprios para estudos com RAPD-PCR após 120, 60 e 10 dias de armazenamento, respectivamente.
(The abstract is excluded from the Creative Commons licence and has been copied with permission by the publisher.)
(original language: Portuguese)
Full text of article
Database assignments for author(s): Luis E.A. Camargo, João Roberto Spotti Lopes, Charles Martins de Oliveira

Research topic(s) for pests/diseases/weeds:
molecular biology - genes

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Pest and/or beneficial records:

Beneficial	Pest/Disease/Weed	Crop/Product	Country	Quarant.
	Dalbulus maidis