Canadian Journal of Microbiology - Revue Canadienne de Microbiologie (1998) 44, 657-666

Phillip Aldridge, Frank Bernhard, Peter Bugert, David L. Coplin and Klaus Geider (1998)
Characterization of a gene locus from Erwinia amylovora with regulatory functions in exopolysaccharide synthesis of Erwinia spp.
Canadian Journal of Microbiology - Revue Canadienne de Microbiologie 44 (7), 657-666
Abstract: In a genomic library of Erwinia amylovora, a locus has been identified that can suppress an Erwinia stewartii rcsA mutant. In addition, the locus induced a mucoid sticky phenotype of colonies in a wild-type strain of Erwinia stewartii and increased exopolysaccharide synthesis in several species of bacteria belonging to the genus Erwinia. An open reading frame was identified at this locus encoding a 225 amino acid protein that contained a helix-turn-helix motif typical of transcriptional regulators. The corresponding gene was subsequently named rcsV (regulator of capsular synthesis affecting viscosity). A mutant of rcsV in wild-type Erwinia amylovora had no detectable phenotype and produced typical levels of amylovoran under laboratory conditions. The rcsV gene on a high copy number plasmid under the control of its own promoter did not alter amylovoran production, in contrast to in-frame fusions of the structural gene in expression vectors. Since even the lac promoter was inert in the expression of rcsV, a DNA-binding protein could inhibit transcription of the gene in Erwinia amylovora. On the other hand, an Erwinia amylovora rcsA mutant was suppressed by rcsV when its promoter was replaced and the structural gene fused in-frame with lacZ ' or malE. Northern blots, with total RNA from Erwinia amylovora, or promoter analysis using the GUS reporter gene did not show expression of rcsV in Erwinia amylovora, although primer extension analysis did. RcsV could be a component involved in the regulation of amylovoran synthesis, and gene expression may require an unknown external signal during the life cycle or pathogenesis of Erwinia amylovora.

Le criblage d'une banque génomique d' Erwinia amylovora a permis d'identifier un locus pouvant rétablir les caractéristiques phénotypiques d'un mutant rcsA d' Erwinia stewartii. Ce locus donne aux colonies de la souche sauvage d' Erwinia stewartii une apparence mucoïde et gluante en plus d'augmenter la production d'exopolysaccharides de plusieurs espèces de bactéries appartenant au genre Erwinia. Un cadre de lecture ouvert codant pour une protéine de 225 acides aminés qui possède un motif hélice-boucle-hélice typique des régulateurs de transcription a été identifié dans ce locus. Le gène correspondant a été nommé rcsV (régulateur de la synthèse de la capsule affectant la viscosité). Une mutation dans le gène rcsV de la souche sauvage d' Erwinia amylovora ne change pas les caractéristiques phénotypiques de façon détectable et le niveau de synthèse d'amylovoran est comparable dans les conditions utilisées en laboratoire. Le gène rcsV n'altère pas la production d'amylovoran lorsqu'il est cloné dans un plasmide ayant un grand nombre de copies et sous le contrôle de son propre promoteur contrairement aux fusions du gène structural dans le cadre de lecture de vecteurs d'expression. Puisque même le lac promoteur ne permet pas l'expression de rcsV, il est possible qu'une protéine liant l'ADN inhibe la transcription de ce gène chez Erwinia amylovora. Par contre, le phénotype d'un mutant rcsA d' Erwinia amylovora a été restauré par rcsV lorsque le gène structural sans son propre promoteur est fusionné dans le cadre de lecture avec lacZ ' ou malE. L'expression de rcsV a été observée par amorce d'élongation mais n'a pu être démontrée ni par buvardage Northern de l'ARN total ni par mesure de l'activité du promoteur avec le gène reporteur GUS. RcsV pourrait être un facteur impliqué dans la régulation de la synthèse d'amylovoran et l'expression de ce gène demanderait un signal extérieur durant le cycle de vie ou de la pathogénèse d' Erwinia amylovora.
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Database assignments for author(s): Klaus Geider

Research topic(s) for pests/diseases/weeds:
molecular biology - genes

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Pest and/or beneficial records:

Beneficial	Pest/Disease/Weed	Crop/Product	Country	Quarant.
	Erwinia amylovora
	Erwinia (genus)